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全波長酶標儀為何如此“與眾不同”呢?

作者:超級管理員    時間:2022-01-14 16:19:27    點擊次數(shù):1268
 

    全波長酶標儀以光柵為分光元件、以微孔板為樣品載具的生化識讀設(shè)備,主要用于科研領(lǐng)域。全波長酶標儀與傳統(tǒng)的濾光片型酶標儀相比,具有如下優(yōu)勢:

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    一、全波長酶標儀波長選擇不受限制


    總體來說,濾片技術(shù)由于發(fā)展已久,配合二向色鏡(其實也就是另一模式的濾光反光濾鏡)等光路系統(tǒng),可以滿足大部分實驗的需要,是日常檢驗的主流。


    但是濾光片型儀器由于受限于濾片的波長和數(shù)量限制,不可能滿足日益增加的實驗類型的檢測需要,而且有時需要對物質(zhì)的吸收、激發(fā)和發(fā)射光譜進行研究,所以后來就誕生了光柵型的儀器。


    二、全波長酶標儀雜光率低,波長準確性高


    光柵型濾光系統(tǒng)儼然已經(jīng)成為了目前通用性多功能酶標儀的主流,多家廠家共同努力,已經(jīng)把光柵技術(shù)推到了歷史新高。在光柵的眾多技術(shù)參數(shù)之中,zui關(guān)鍵的無疑就是光柵的雜光率和波長選擇的準確性了。


    雜光率指得就是光源通過光柵后,得到的光線中,“不需要”的波長的光占所標稱波長的光的比例,表征了濾光的純度。由于光線干涉、衍射等的復(fù)雜性,無論使用濾光片還是光柵,雜光都是不可避免的。各種濾光技術(shù)的本質(zhì)就是要想辦法把雜光盡可能地去掉。一般來說,濾光片型的雜光率在10-4——10-5之間,光柵型的可以做到10-6——10-7。由于此類雜光是非特異的,而且會直接進入zui后的檢測器,所以有多少的雜光就會引入多少的隨機誤差。在熒光等檢測過程中,由于檢測器存在放大效應(yīng),雜光率的干擾也會被指數(shù)級放大。因此,雜光率就是一個濾光系統(tǒng)的首要性能指標。


    光柵的另一個重要指標就是波長選擇的準確性。因為很多檢測是依賴于物質(zhì)在某個波長的特征圖譜。就像DNA/RNA的OD260濃度測定,實際檢測波長偏離260nm幾個nm以上的話,OD值與zui終濃度之間的數(shù)學(xué)關(guān)系就會發(fā)生改變。因此,一組性能優(yōu)良的光柵系統(tǒng),它的波長選擇準確性應(yīng)該是在±0.5——1nm之間。波長偏離過大有時就會影響到zui終結(jié)果的準確性,


    這兩個參數(shù)可謂是光柵甚至濾光片濾光系統(tǒng)zui關(guān)鍵的技術(shù)參數(shù),直接影響到的是得到數(shù)據(jù)是否是真正所要測量的結(jié)果,是實驗結(jié)果可靠性的zui基本要求。


    三、全波長酶標儀檢測靈敏度高


    在保證檢測可靠的基礎(chǔ)上,不同儀器的下一個差異就體現(xiàn)在檢測的靈敏度上面,這時人們關(guān)心的就是儀器能夠檢測到多弱的信號。


    靈敏度涉及了整個光路系統(tǒng)的設(shè)計和選料,很難說某一個部件會起決定性作用。但是有一點,在各種單功能檢測項目中,光吸收檢測用非放大型的光電二極管、熒光檢測用光電倍增管、發(fā)光檢測用專門設(shè)計的單光子計數(shù)光電倍增管,這三種不同的檢測器是各自檢測領(lǐng)域的優(yōu)先選擇。


    各單項檢測的*結(jié)果都是用相應(yīng)檢測器完成的。當然也有的儀器出于成本等考慮,用一個檢測器兼容多種檢測模式,這在一定程度上也能完成實驗需求,但是在性能上也會有所犧牲折中,無法實現(xiàn)各項檢測都達到*化。


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